안녕하세요, 한국화학융합시험연구원 환경독성센터의 김유미입니다.

먼저 바쁘신 와중에도 교육을 진행해주시고 실습 전반에 걸쳐 세심한 지도를 해주신 이소현 박사님을 비롯한 여러 박사님들께 감사드립니다.

이번 qPCR(Real-Time Quantitative PCR) 교육은 qRT-PCR의 기본 원리를 이해하고, 제브라피시(Zebrafish)로부터 RNA 추출을 비롯한 cDNA 합성, qPCR 분석, 결과 해석까지 전 과정을 직접 수행하는 것을 목표로 진행되었습니다.

이론교육에서는 qPCR의 기본 원리, primer design 방법과 desgin 시 주의사항, 형광 검출 방식(SYBR Green / TaqMan)과 각각의 방법에 대한 장단점, 그리고 Ct 값 기반의 정량 계산법(ΔCt, ΔΔCt) 등을 세세하게 알려주셨습니다. 이를 바탕으로 실습 단계에서 실제 데이터를 얻는 전 과정을 경험할 수 있었습니다.

실습에서는 제브라피시로부터 총 RNA를 추출한 후 ararose gel을 통해 RNA의 추출이 되었는지 확인하였고  cDNA를 합성하였습니다. 이후 target gene primer을 설정하여 qPCR 증폭 반응을 수행했습니다. 그 결과, 일정 주기 이후 형광 신호가 점차 증가하는 양상을 확인할 수 있었으며 Control과 Mutant에서 target gene의 차이를 실시간으로 확인할 수 있었습니다. 또한 Melting curve 분석에서는 단일 피크(single peak)가 형성됨으로써 Design된 primer의 이상유무를 확인하였습니다.

특히, qRT-PCR 과정에서 시료 품질과 피펫 control이 결과 신뢰도에 직접적으로 영향을 미친다는 점을 실습을 통해 체감할 수 있었으며, 실험 과정별로 해당 실험에 대한 주의사항 및 노하우를 알려주셔서 감사합니다.

이번 교육을 통해 qPCR의 이론적 이해뿐만 아니라, 실제 분석 과정에서 발생할 수 있는 trouble shooting과 해결 방안까지 알려주셔서 감사합니다.
다시 한 번 교육을 준비하고 지도해주신 박사님들께 깊이 감사드립니다.

감사합니다.
한국화학융합시험연구원 환경독성센터
김유미 드림